BspQI
BspQI kan uttrykkes rekombinant i E. coli som kan gjenkjenne spesifikke steder og produseres under
BspQI, en IIs-restriksjonsendonuklease-restriksjonsendonuklease, er avledet fra en rekombinant E. coli-stamme som bærer det klonede og modifiserte BspQI-genet fra Bacillus sphaericus.Den kan gjenkjenne spesifikke steder, og gjenkjennelsessekvens og spaltningssteder er som følger:
5' · · · ·GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · ·3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Produktfunksjoner
1. Høy aktivitet, rask fordøyelse;
2. Lav stjerneaktivitet, sikrer nøyaktig skjæring som "skalpell";
3. Uten BSA og fri for dyr;
Metyleringsfølsomhet
Dam metylering:Ikke sensitiv;
Dcm metylering:Ikke sensitiv;
CpG-metylering:Ikke sensitiv;
Lagringsforhold
Produktet skal sendes ≤ 0 ℃;Oppbevares ved -25~- 15 ℃ tilstand.
Lagringsbuffer
20 mM Tris-HCl, 0,1 mM EDTA, 500 mM KCl, 1,0 mM ditiotreitol, 500 ug/ml rekombinant albumin, 0, 1 % Trition X-100 og 50 % glyserol (pH 7,0 ved 25°C).
Enhetsdefinisjon
Én enhet er definert som mengden enzym som kreves for å fordøye 1 µg internkontroll-DNA i løpet av 1 time ved 50 °C i et totalt reaksjonsvolum på 50 µL.
Kvalitetskontroll
Proteinrenhetsanalyse (SDS-PAGE):Renheten til BspQI var ≥95 % bestemt ved SDS-PAGE-analyse.
RNase:10U BspQI med 1,6 μg MS2 RNA i 4 timer ved 50 ℃ gir ingen nedbrytning som bestemt ved agarosegelelektroforese.
Ikke-spesifikk DNase-aktivitet:10U BspQI med 1μg λ DNA ved 50 ℃ i 16 timer, sammenlignet med 50 ℃ i 1 time, gir ikke noe overskudd av DNA, bestemt ved agarosegelelektroforese.
Ligering og omkutting:Etter fordøyelse av 1 μg λDNA med 10U BspQI, kan DNA-fragmenter ligeres med T4 DNA-ligase ved 16ºC.Og disse ligerte fragmentene kan kuttes på nytt med BspQI.
E coli DNA: E. coli 16s rDNA-spesifikk TaqMan qPCR-deteksjon viste at E.coli-genomrest ≤ 0,1 pg/ul.
Vertsproteinrester:≤ 50 ppm
Bakteriell Endotoksin: LAL-test, i henhold til Chinese Pharmacopoeia IV 2020-utgaven, gelgrensetestmetode, generell regel (1143).Bakterielt endotoksininnhold bør være ≤10 EU/mg.
Reaksjonssystem og forhold
| Komponent | Volum |
| BspQ I(10 U/μL) | 1 μL |
| DNA | 1 μg |
| 10 x BspQ I-buffer | 5 μL |
| dd H2O | Opptil 50 μL |
Reaksjonsbetingelser: 50 ℃, 1-16 t.
Varmeinaktivering: 80°C i 20 min.
Det anbefalte reaksjonssystemet og forholdene kan gi relativt god enzymfordøyelseseffekt, som kun er til referanse, vennligst se de eksperimentelle resultatene for detaljer.
Produktapplikasjon
Restriksjon endonukleasefordøyelse, Rask kloning.
Notater
1. Volumet av enzym ≤ 1/10 av reaksjonsvolumet.
2. Stjerneaktivitet kan oppstå når glyserolkonsentrasjonen er mer enn 5 %.
3. Spaltningsaktivitet kan oppstå når substratet er under anbefalt forhold.
