CHO HCP ELISA-sett
En ett-trinns immunosorberende ELISA-metode brukes i denne analysen.Prøver som inneholder CHOK1 HCP reagerer samtidig med HRP-merket geite-anti-CHOK1-antistoff og anti-CHOK1-antistoff belagt på ELISA-platen, og danner til slutt et sandwichkompleks av fastfase-antistoff-HCP-merket antistoff.Ubundet antigen-antistoff kan fjernes ved å vaske ELISA-platen.TMB-substratet tilsettes brønnen for tilstrekkelig reaksjon.Fargeutviklingen stoppes etter tilsetning av stoppløsningen, og OD eller absorbansverdien til reaksjonsløsningen ved 450/650 nm avleses med en mikroplateleser.OD-verdien eller absorbansverdien er proporsjonal med HCP-innholdet i løsningen.Ut fra dette kan HCP-konsentrasjonen i løsningen beregnes etter standardkurven.
applikasjon
Dette settet brukes til å kvantitativt påvise innholdet av CHOK1 vertscelleproteinrester i prøver.
Componenter
| S/N | Komponent | Konsentrasjon | Lagringsforhold |
| 1 | CHOK1 HCP Standard | 0,5 mg/ml | ≤–20 ℃ |
| 2 | Anti-CHO HCP-HRP | 0,5 mg/ml | ≤–20 ℃, beskyttes mot lys |
| 3 | TMB | NA | 2-8 ℃, beskyttes mot lys |
| 4 | 20 × PBST 0,05 % | NA | 2-8 ℃ |
| 5 | Stopp løsning | NA | RT |
| 6 | Mikroplateforseglere | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8 ℃ |
| 8 | Høy adsorpsjon forbeleggsplater | NA | 2-8 ℃ |
Utstyr nødvendig
| Forbruksvarer / Utstyr | Produksjon | Katalog |
| Mikroplate-leser | Molekylære enheter | Spectra Max M5, M5e eller tilsvarende |
| Termomixer | Eppendorf | Eppendorf/5355, eller tilsvarende |
| Vortex mikser | IKA | MS3 Digital, eller tilsvarende |
Oppbevaring og stabilitet
1.Transport ved -25~-15°C.
2.Lagringsbetingelser er som vist i tabell 1;komponentene 1-2 lagres ≤–20°C,5-6 lagres RT,3、4、7、8 lagres ved 2-8 ℃;gyldighetsperioden er 12 måneder.
Produktparametere
1.Følsomhet: 1ng/ml
2.Deteksjonsområde: 3-100 ng/ml
3.Presisjon: Intra-assay CV≤ 10 %, inter-assay CV≤ 15 %
4.HCP-dekning: >80 %
5.Spesifisitet: Dette settet er universelt da det spesifikt reagerer med CHOK1 HCP uavhengig av renseprosess.
Klargjøring av reagens
1.PBST 0,05 %
Ta 15 ml 20×PBST 0,05%, fortynnet i ddH2O, og fylt opp til 300 ml.
2.1,0 % BSA
Ta 1 g BSA fra flasken og fortynn i 100 ml PBST 0,05 %, bland godt til det er helt oppløst, og oppbevar ved 2-8°C.Den tilberedte fortynningsbufferen er gyldig i 7 dager.Det anbefales å forberede seg etter behov.
3.Deteksjonsløsning 2μg/mL
Ta 48 μL 0,5 mg/ml Anti-CHO HCP-HRP og fortynn i 11 952 μL 1 % BSA for å oppnå en endelig konsentrasjon på 2 μg/ml deteksjonsløsning.
4.QC og utarbeidelse av CHOK1 HCP-standarder
| Rør Nei. | Opprinnelig | Konsentrasjon | Volum | 1 % BSA | totalt volum | Endelig |
| A | Standard | 0,5 mg/ml | 10 | 490 | 500 | 10 000 |
| B | A | 10 000 | 50 | 450 | 500 | 1000 |
| S1 | B | 1000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Tabell: Utarbeidelse av kvalitetskontroll og standarder
Analyseprosedyre
1.Klargjør reagensene som angitt i "Reagenspreparering" ovenfor.
2.Ta 50 μL standarder, prøver og kvalitetskontroller (se tabell 3) i hver brønn, og tilsett deretter 100 μL deteksjonsløsning (2 μg/ml);Dekk platen med sealer, og plasser ELISA-platen på termomixeren.Inkuber ved 500 rpm, 25±3 ℃ i 2 timer.
3.Snu mikroplaten i vasken og kast beleggsløsningen.Pipetter 300 μL PBST 0,05 % i hver brønn for å vaske ELISA-platen og kaste løsningen, og gjenta vaskingen 3 ganger.Vend platen på et rent papirhåndkle og tørk.
4.Tilsett 100 μL TMB-substrat (se tabell 1) til hver brønn, forsegl ELISA-platen og inkuber i mørket ved 25±3 ℃ i 15 minutter.
5.Pipetter 100 μL stoppløsning i hver brønn.
6.Mål absorbansen ved bølgelengden 450/650 nm med mikroplateleser.
7.Analyser data med SoftMax eller tilsvarende programvare.Plot standardkurven ved å bruke en fire-parameter logistisk regresjonsmodell.
Eksempel på standardkurve
MERK: Hvis konsentrasjonen av HCP i prøven overstiger den øvre grensen for standardkurven, må den fortynnes riktig med fortynningsbuffer før testing.
MERKNADER
Stoppløsningen er 2M svovelsyre, vær forsiktig for å unngå sprut!
