DNase I
DNase I (Deoksyribonuklease I) er en endodeoksyribonuklease som kan fordøye enkelt- eller dobbelttrådet DNA.Den gjenkjenner og spalter fosfodiesterbindinger for å produsere monodeoksynukleotider eller enkelt- eller dobbelttrådede oligodeoksynukleotider med fosfatgrupper ved 5'-terminalen og hydroksyl ved 3'-terminalen.Aktiviteten til DNase I avhenger av Ca2+ og kan aktiveres av toverdige metallioner som Mn2+ og Zn2+.5mM Ca2+ beskytter enzymet mot hydrolyse.I nærvær av Mg2+ kunne enzymet tilfeldig gjenkjenne og spalte et hvilket som helst sted på en hvilken som helst DNA-streng.I nærvær av Mn2+ kan de doble DNA-trådene samtidig gjenkjennes og spaltes på nesten samme sted for å danne flatende DNA-fragmenter eller klebrige ende-DNA-fragmenter med 1-2 nukleotider som stikker ut.
Produkteiendom
Bovin Pancreas DNase I ble uttrykt i gjærekspresjonssystem og renset.
Componenter
| Komponent | Volum | |||
| 0,1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNase I, RNase-fri | 20 μL | 200 μL | 1 ml | 10 ml |
| 10×DNase I-buffer | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Transport og lagring
1. Lagringsstabilitet: – 15℃~-25℃ for lagring;
2. Transportstabilitet: Transport under isposer;
3. Leveres i: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50 % glyserol, pH 7,6 ved 25 ℃.
Enhetsdefinisjon
En enhet er definert som mengden enzym som fullstendig vil bryte ned 1 µg pBR322 DNA på 10 minutter ved 37°C.
Kvalitetskontroll
RNase:5U DNase I med 1,6 μg MS2 RNA i 4 timer ved 37 ℃ gir ingen nedbrytning som bestemt ved agarosegelelektroforese.
Bakteriell Endotoksin:LAL-test, i henhold til Chinese Pharmacopoeia IV 2020-utgaven, gelgrensetestmetode, generell regel (1143).Bakterielt endotoksininnhold bør være ≤10 EU/mg.
Instruksjoner for bruk
1. Forbered reaksjonsløsningen i det RNase-frie røret i henhold til proporsjonene som er oppført nedenfor:
| Komponent | Volum |
| RNA | X μg |
| 10 × DNase I-buffer | 1 μL |
| DNase I, RNase-fri (5U/μL) | 1 U per μg RNA |
| ddH2O | Opptil 10 μL |
2,37 ℃ i 15 minutter;
3. Tilsett termineringsbufferen for å stoppe reaksjonen, og varm opp ved 65 ℃ i 10 minutter for å inaktivere DNase I. Prøven kan brukes direkte til neste transkripsjonseksperiment.
Notater
1.Bruk 1U DNase I per μg RNA, eller 1U DNase I for mindre enn 1μg RNA.
2.EDTA bør tilsettes til en sluttkonsentrasjon på 5 mM for å beskytte RNA fra å bli nedbrutt under enzyminaktivering.
