Temperatursensitiv UNG

Temperatursensitiv UNG (TS-UNG) er en oppnådd ved rekombinant ekspresjon i E. coli.Enzymet katalyserer frigjøringen av fritt uracil fra uracilholdig enkelt- og dobbelttrådet DNA og er inaktivt mot RNA.Sammenlignet med det konvensjonelle UNG-enzymet av E. coli-genopprinnelse, har TS-UNG-enzymet høyere aktivitet ved lave temperaturer (20℃~37℃) og er temperaturfølsomt og lett inaktivert (50℃), og unngår nedbrytning av dUTP-holdig amplifikasjon produkter ved romtemperatur av restaktiviteten som kan forbli etter inaktivering av det konvensjonelle UNG-enzymet.Derfor er TS-UNG-enzym ikke bare egnet for PCR-forurensningsforebyggende reaksjoner, men passer også godt med RT-PCR-amplifikasjonsprogrammet og kan brukes i RT-PCR-forurensningsforebyggende reaksjon.

Anbefalt søknad

Kontamineringsforebyggende amplifikasjon

Lagringsforhold

-20°C for langtidsoppbevaring, bør blandes godt før bruk, unngå hyppig frys-tine.

Lagringsbuffer

20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 100 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, stabilisator, 50 % glyserol.

Enhetsdefinisjon

Mengden enzym som kreves for å bryte ned 1 µg enkelttrådet DNA som inneholder dU-baser i løpet av 1 time ved 37°C er 1 aktivitetsenhet (U).

Kvalitetskontroll

1.SDS-PAGE elektroforetisk renhet større enn 98 %

2.Nedbrytningsaktivitet, batch-til-batch-kontroll, stabilitet

3.Ingen eksogen nukleaseaktivitet, ingen eksogen endonuklease eller eksonukleasekontaminering.

Bruksanvisning

Merk: a: Hvis den brukes til qPCR/qRT-PCR, bør den fluorescerende proben legges til reaksjonssystemet.Vanligvis kan en endelig primerkonsentrasjon på 0,2 μM gi gode resultater;når reaksjonsytelsen er dårlig, kan primerkonsentrasjonen justeres i området 0,2-1 μM.Vanligvis er probekonsentrasjonen optimalisert i området 0,1-0,3 μM.Konsentrasjonsgradienteksperimenter kan utføres for å finne den beste kombinasjonen av primer og probe.

Notater

1.Den optimale reaksjonstemperaturen til TS-UNG enzym er relativt lav, og den kan optimaliseres i området 20 ℃ ~ 37 ℃, doseringen av enzym og reaksjonstiden kan optimaliseres i området 0,1 ~ 0,5 U, 5 ~ 10 min;og enzymet kan inaktiveres i prosessen med revers transkripsjon.

2.Den er egnet for PCR og RT-PCR for å forhindre kontaminering.

3.Unngå hyppig frys-tine, og ikke utsett for store temperatursvingninger.

4.Ulike gener som skal amplifiseres har ulik utnyttelseseffektivitet av dUTP og følsomhet for UNG-enzym, derfor, hvis bruk av UNG-system fører til en reduksjon i deteksjonsfølsomhet, bør reaksjonssystemet justeres og optimaliseres, hvis du trenger teknisk støtte, vennligst kontakt vårt selskap.