Ultra Nuclease
UltraNuclease er en genmanipulert endonuklase avledet fra Serratia marcescens, som er i stand til å bryte ned DNA eller RNA, enten dobbelt- eller enkelttrådet, lineær eller sirkulær under et bredt spekter av tilstander, fullstendig bryte ned nukleinsyrer til 5'-monofosfat oligonukleotider med 3-5 baser. .Etter genteknologisk modifikasjon ble produktet fermentert, uttrykt og renset i Escherichia coli (E. coli), noe som reduserer viskositeten til cellesupernatant og cellelysat vitenskapelig forskning, men også forbedrer renseeffektiviteten og funksjonell forskning på protein.Det kan også brukes i genterapi, virusrensing, vaksineproduksjon, protein- og polysakkaridfarmasøytisk industri som et vertsrester for nukleinsyrefjerning.
Produktfunksjoner
| CAS-nr. | 9025-65-4 |
| EF-nr. | |
| Molekylær vekt | 30 kDa |
| Isoelektrisk punkt | 6,85 |
| Proteinrenhet | ≥99 %（SDS-PAGE & SEC-HPLC） |
| Spesifikk aktivitet | ≥1.1×106U/mg |
| OptimalTemperatur | 37°C |
| Optimal pH | 8.0 |
| ProteaseAktivitet | negativ |
| Biobelastning | ＜10CFU/100 000U |
| Gjenværende vertscelleprotein | ≤10 ppm |
| Tungt metall | ≤10 ppm |
| Bakteriell endotoksin | ＜0,25EU/1000U |
| Lagringsbuffer | 20 mM Tris-HCl, pH 8,0, 2 mM MgCl2, 20 mM NaCl, 50 % glyserol |
Lagringsforhold
≤0°C transport；-25~-15°C Lagring, 2 års gyldighet (unngå frysing-tining).
Enhetsdefinisjon
Mengden enzym som ble brukt til å endre absorpsjonsverdien til △A260 med 1,0 innen 30 minutter ved 37 °C, pH 8,0, tilsvarende fordøyd 37μg laksesæd-DNA ved å kutte i oligonukleotider, ble definert som en aktiv enhet (U).
Kvalitetskontroll
Gjenværende vertscelleprotein: ELISA-sett
•Protease Rester: 250KU/mL UltraNuclease reagerte med substrat i 60 minutter, ingen aktivitet ble påvist.
•Bakteriell endotoksin: LAL-Test, Pharmacopoeia of the People's Republic of China Volume 4 (2020 Edition) gelgrensetestmetode.Generelle regler (1143).
•Biobelastning: Pharmacopoeia of the People's Republic of China bind 4 (2020-utgaven) – Generelt
Regler for sterilitetstest (1101), PRC National Standard, GB 4789.2-2016.
•Tungt metall:ICP-AES, HJ776-2015.
Operasjon
UltraNuclease-aktivitet ble signifikant hemmet når SDS-konsentrasjonen var over 0,1 % eller EDTA
konsentrasjonen var over 1mM. Overflateaktivt middel Triton X-100, Tween 20 og Tween 80 hadde ingen effekt på nuklease
egenskaper når konsentrasjonen var under 1,5 %.
| Operasjon | Optimal drift | Gyldig operasjon |
| Temperatur | 37℃ | 0-45 ℃ |
| pH | 8,0-9,2 | 6,0-11,0 |
| Mg2+ | 1-2mM | 1-15 mm |
| DTT | 0-100 mm | >100mM |
| 2-merkaptoetanol | 0-100 mm | >100mM |
| Monovalent metallion （Na+, K+ osv.) | 0-20 mM | 0-200 mm |
| PO43- | 0-10 mM | 0-100 mm |
Bruk og dosering
• Fjern eksogen nukleinsyre fra vaksineprodukter, reduser risikoen for gjenværende nukleinsyretoksisitet og forbedre produktsikkerheten.
• Reduser viskositeten til fôrvæsken forårsaket av nukleinsyre, forkort behandlingstiden og øk proteinutbyttet.
• Fjern nukleinsyren som omhyllet partikkelen (virus, inklusjonslegeme, etc.), som bidrar til
til frigjøring og rensing av partikkelen.
| Eksperimentell type | Proteinproduksjon | Virus, vaksine | Cellemedisiner |
| Celler nummer | 1g celle våtvekt (resuspendert med 10 ml buffer) | 1L gjæring flytende supernatant | 1L kultur |
| Minimumsdosering | 250U | 100U | 100U |
| Anbefalt dosering | 2500U | 25 000 U | 5000U |
• Nukleasebehandling kan forbedre oppløsningen og gjenvinningen av prøven for kolonnekromatografi, elektroforese og blotting-analyse.
• Ved genterapi fjernes nukleinsyre for å oppnå rensede adeno-assosierte virus.
