UDG/UNG enzymer
UDG (uracil DNA-glykosylase) kan katalysere hydrolysen av den N-glykosidiske koblingen mellom uracilbasen og sukkerfosfatryggraden i ssDNA og dsDNA.Den kan enkelt kontrollere aerosolforurensning og er egnet for vanlige molekylærbiologiske systemer som PCR, qPCR, RT-qPCR og LAMP.
Spesifikasjoner
| Uttrykksvert | Rekombinant E. coli med uracil DNA-glykosylase-gen |
| Molekylær vekt | 24. 8kDa |
| Renhet | ≥95 % (SDS-SIDE) |
| Varmeinaktivering | 95 ℃, 5~10 min |
| Enhetsdefinisjon | En enhet (U) er definert som mengden enzym som kreves for å katalysere hydrolysen av 1 μg dU-holdig dsDNA på 30 minutter ved 25 ℃. |
Oppbevaring
Produktet bør oppbevares ved -25℃~-15°C i to år.
Bruksanvisning
1.Fremstilling av PCR-reaksjonsblandingen i henhold til følgende system
| Komponenter | Volum (μL) | Sluttkonsentrasjon |
| 10×PCR-buffer (Mg²+Pluss) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1,5 mmol/L |
| dUTP(10 mmol/L) | 3 | 0,6 mmol/L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP (10 mmol/utluting) | 1 | 0,2 mmol/Utlut |
| Mal DNA | X | - |
| Primer1 (10 μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Primer 2 (10 μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Taq DNA-polymerase (5 U/μL) | 0. 5 | 0,05 U/μL |
| Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH2O | Opp til 50 | - |
Merk: I henhold til de eksperimentelle kravene kan den endelige konsentrasjonen av dUTP justeres mellom 0,2-0,6 mmol/L, og 0,2 mmol/L dTTP kan tilsettes selektivt.
2.Amplifikasjonsprosedyre
| Syklustrinn | Temperatur | Tid | Sykluser |
| dU-holdig maldegradering | 25 ℃ | 10 minutter | 1 |
| UDG-aktivering, mal initial denaturering | 95 ℃ | 5~10 minutter | 1 |
| Denaturering | 95 ℃ | 10 sek |
30-35 |
| Gløding | 60 ℃ | 20 sek | |
| Utvidelse | 72℃ | 30 sek/kb | |
| Endelig utvidelse | 72℃ | 5 min | 1 |
Merk: Reaksjonstiden ved 25°C kan justeres innen 5-10 minutter i henhold til de eksperimentelle kravene.
Notater
1.UDG er aktiv i de fleste PCR-reaksjonsbuffere.
2.Enzymer bør oppbevares i en isboks eller på et isbad når de brukes, og bør oppbevares ved -20°C umiddelbart etter bruk.
3.Vennligst bruk nødvendig PPE, slik laboratoriefrakk og hansker, for å sikre din helse og sikkerhet!
