Multiplex One Step RT-qPCR Premix
Beskrivelse
Kat.nr.: HCR5141A
Multiplex One Step RT-qPCR Premix er et multipleks kvantitativt PCR-sett basert på RNA som mal.I forsøket utføres revers transkripsjon og kvantitativ PCR i samme reaksjonsrør, noe som forenkler den eksperimentelle operasjonen og reduserer risikoen for kontaminering.Den unike utformingen av buffer og enzymblanding kan brukes i ett-trinns lyofilisert system.Settet bruker varmebestandig omvendt transkriptase for effektiv syntese av første streng cDNA ved bruk av hotstart Taq DNA Polymerase for kvantitativ amplifikasjon.Den inneholder optimert reaksjonsbuffer, enzymblanding etc., og faktorer som effektivt hemmer ikke-spesifikk PCR-amplifikasjon og forbedrer amplifikasjonseffektiviteten til flere qPCR-reaksjoner ble lagt til, noe som muliggjør multippel fluorescens kvantitativ amplifikasjon samtidig som amplifikasjonseffektiviteten til primere sikres.
Komponenter
| Navn |
| 1. Lyo-buffer |
| 2. Lyo-enzymblanding |
| 3. Lyo-beskytter |
Transportforholdion
A: Lyo-buffer og beskyttelsesmiddel: -25~-15 ℃, holdbarhet er 1 år.
B: Lyo-enzymblanding, 2-8 ℃, holdbarhet er 6 måneder.
Instruksjon for drift
1. Reaksjonssystem (ta 25μL som eksempel)
| Komponenter | Volum (μL) | Endelig konsentrasjon |
| Lyo-buffer | 6 | 1* |
| Lyo-enzymblanding | 1 | - |
| Lyo-Protectant | 8 | - |
| Primerblanding (10 μM) | 1 | 0,1-1 uM |
| Probe Mix (10μM) | 0,5 | 0,05-0,5uM |
| RNA-mal | 5 | - |
| DEPC H2O | Opptil 25 | - |
2. Optimalisert sykkelprotokoll
1) Standard sykkelprotokoll
| Reaksjonsstadiet | Temperatur | Tid | Syklus | |
| 1 | Omvendt transkripsjon | 50°Ca | 10 min | 1 |
| 2 | Innledende denaturering | 95°C | 5 min | 1 |
| 3 | Amplifikasjonsreaksjon | 95°C | 15 sek | 45 sykluser |
| 60°Cb | 30 sekc |
2) Fast Cycling Protocol
|
| Reaksjonsstadiet | Temperatur | Tid | Syklus |
| 1 | Omvendt transkripsjon | 50°Ca | 2 min | 1 |
| 2 | Innledende denaturering | 95°C | 2 sek | 1 |
| 3 | Amplifikasjonsreaksjon | 95°C | 1 sek |
45 sykluser |
| 60°Cb | 13 sekc |
Merk:
a) Omvendt transkripsjon: Temperaturen kan velges 42°C eller 50°C i 10-15 minutter.
b) Amplifikasjonsreaksjon: Temperaturen justeres i henhold til Tm-verdien til de utformede primerne.
c)Fluorescens signal oppkjøp: Vennligst still den eksperimentelle prosedyren i henhold til kravene iinstrumenthåndbok.
Teknisk informasjon/spesifikasjoner
| Varm start | Innebygd varmstart |
| Deteksjonsmetode | Primer-probe deteksjon |
| PCR metode | Ett trinn RT-qPCR |
| Type prøve | RNA |
Notater
1. Dette produktet er kun til forskningsbruk.
2. Vennligst bruk nødvendig PPE, slik laboratoriefrakk og hansker, for å sikre din helse og sikkerhet!
