One Step Fast RT-qPCR Probe Premix-UNG
Kat.nr.: HCR5143A
One Step RT-qPCR Probe Kit (FOR FAST) er et probebasert RT-qPCR hurtigdeteksjonssett egnet for enkeltpleks eller multipleks kvantitativ PCR ved bruk av RNA som mal (som RNA-virus).Dette produktet bruker en ny generasjon antistoffmodifisert Taq DNA-polymerase og ett-trinns dedikert revers transkriptase, med en optimalisert buffer for rask amplifikasjon, som har raskere amplifikasjonshastighet, høyere amplifikasjonseffektivitet og spesifisitet.Den støtter balansert forsterkning i både enkeltpleks og multipleks av prøver med lav og høy konsentrasjon på kort tid.
Komponenter
1. 5×RT-qPCR-buffer (U+)
2. Enzymblanding (U+)
Merknader:
en.5×RT-qPCR-buffer (U+) inkluderer dNTP og Mg2+;
b.Enzymblanding (U+) inkluderer revers transkriptase, Hot Start Taq DNA-polymerase, RNase-hemmer og UDG;
c.Bruk RNase-frie tips, EP-rør, etc.
Før bruk blandes 5×RT-qPCR-bufferen (U+) grundig.Hvis det er noe nedbør etter tining, vent til bufferen er tilbake til romtemperatur, bland og oppløs, og bruk dem deretter normalt.
Lagringsforhold
Produktet sendes med tørris og kan lagres ved -25~-15 ℃ i 1 år.
Bruksanvisning
1. Reaksjon System
| Komponenter | Volum (20 μL reaksjon) |
| 2 × RT-qPCR buffer | 4μL |
| Enzymblanding (U+) | 0,8 μL |
| Primer frem | 0,1~ 1,0μM |
| Primer revers | 0,1~ 1,0μM |
| TaqMan-sonde | 0,05~0,25μM |
| Mal | X μL |
| RNase-fritt vann | opptil 25μL |
Merknader: Reaksjonsvolumet er 10-50μL.
2. Sykkelprotokoll (Standard)
| Syklus steg | Temp. | Tid | Sykluser |
| Omvendt transkripsjon | 55 ℃ | 10 min | 1 |
| Innledende denaturering | 95 ℃ | 30 sek | 1 |
| Denaturering | 95 ℃ | 10 sek | 45 |
| Gløding/Forlengelse | 60 ℃ | 30 sek |
| Sykkelprotokoll (Fort) Syklus steg |
Temp. |
Tid |
Sykluser |
| Omvendt transkripsjon | 55 ℃ | 5 min | 1 |
| Innledende denaturering | 95 ℃ | 5 s | 1 |
| Denaturering | 95 ℃ | 3 s | 43 |
| Gløding/Forlengelse | 60 ℃ | 10 s |
Merknader:
en.Omvendt transkripsjonstemperatur er mellom 50 ℃ til 60 ℃, å øke temperaturen bidrar til å forsterke komplekse strukturer og maler med høyt CG-innhold;
b.Den optimale annealingstemperaturen må justeres basert på Tm-verdien til primeren, og velge den korteste tiden for fluorescenssignalinnsamling basert på sanntids PCR-instrumentet.
Notater
Vennligst bruk nødvendig PPE, slik laboratoriefrakk og hansker, for å sikre din helse og sikkerhet!
