One Step RT-qPCR SYBR Grønn Premix
Kat.nr.: HCB5140A
One Step RT-qPCR Syber Green Premix er for fluorescenskvantifisering basert på SYBR Green I-fargestoff.Ved å bruke genspesifikke primere fullføres revers transkripsjon og qPCR-reaksjoner i ett rør, noe som eliminerer behovet for gjentatte åpninger og pipettering, noe som forbedrer analyseeffektiviteten betraktelig og reduserer risikoen for kontaminering.For RNA-prøver bruker settet varmebestandig omvendt transkriptase for effektiv cDNA-syntese og HotStart Taq DNA-polymerase for kvantitativ amplifikasjon.Under det optimaliserte buffersystemet kan sensitiviteten til settet være så høy som 0,1 pg for høyt uttrykte mål og så høy som 1 pg for moderat uttrykte mål.Settet er egnet for amplifisering og kvantifisering av DNA-prøver.Den muliggjør sensitiv påvisning og kvantifisering av nukleinsyrer fra forskjellige plante- og dyreprøver, celler og mikroorganismer.
Komponenter
| No | Navn | Volum | Volum |
| 1 | Avansert buffer | 250 μL | 2×1,25 ml |
| 2 | Avansert enzymblanding | 20 μL | 200 μL |
| 3 | RNase-fri H2O | 250 μL | 2×1,25 ml |
Lagringsforhold
Dette produktet bør lagres ved -25~-15 ℃ vekk fra lys i 1 år.
Bruksanvisning
1.Reaksjonssystemkonfigurasjond
| Komponenter | Volum (μL) | Volum (μL) | Sluttkonsentrasjon |
| Avansert buffer | 12.5 | 25 | 1× |
| Avansert enzymblanding | 1 | 2 | - |
| Forward Primer (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| Omvendt primer (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| RNA-tamplateb | X | X | - |
| RNase-fri H2Oc | til 25 | til 50 | - |
Merknader:
1) a.TDen endelige primerkonsentrasjonen var 0,2 μmol/L, som også kunne justeres mellom 0,1 og 1 μmol/L etter behov.
2) b.Reagenset er ekstremt følsomt, med totalt RNA i området 1pg-1μg, og testing av humane prøver viste en optimal tilførsel på 1 pg-100 ng, kontrollert for en total Ct-verdi i området 15-30 etter behov.
3) c.Det anbefales å bruke 20μL eller 50μL for å sikre gyldigheten og reproduserbarheten av målgenamplifikasjon.
4) d.Vennligst forbered deg i den ultra-rene benken og bruk nukleaserester-frie tips og reaksjonsrør;tips med filterpatroner anbefales.Unngå krysskontaminering og aerosolkontaminering.
2.Reaksjonsprogram
| Syklustrinn | Temp. | Tid | Sykluser |
| Omvendt transkripsjon | 50 ℃a | 6 minutter | 1 |
| Innledende denaturering | 95 ℃ | 5 minutter | 1 |
| Amplifikasjonsreaksjon | 95 ℃ | 15 sek | 40 |
| 60 ℃b | 30 sek | ||
| Smeltekurvestadiet | Instrumentstandarder | 1 | |
Merknader:
1) a.Den omvendte transkripsjonstemperaturen kan velges mellom 50-55°C i henhold til de eksperimentelle behovene.For DNA-prøver kan revers transkripsjonsprosessen utelates.
2) b.I spesielle tilfeller kan gløde-/forlengelsestemperaturen justeres i henhold til primerens Tm-verdi, 60°C anbefales.
Notater
1. Dette produktet er kun til forskningsbruk.
2. Bruk laboratoriefrakker og engangshansker for din egen sikkerhet.
