Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
Kat.nr.: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) er et multipleks kvantitativt PCR-sett basert på RNA som mal.I prosessen med eksperimentet ble det utført revers transkripsjon og kvantitativ PCR i samme rør, noe som forenklet den eksperimentelle operasjonen og reduserte risikoen for kontaminering.I dette settet ble den første strengen cDNA effektivt syntetisert av varmebestandig revers transkriptase og kvantitativt amplifisert av HotStart Tag DNA Polymerase.Settet inneholder hovedsakelig optimalisert MP-buffer, enzymblanding osv. Bufferløsningen inneholder allerede Mg2+og dNTP.I tillegg tilsettes faktorene som effektivt kan hemme den ikke-spesifikke PCR-amplifikasjonen og forbedre amplifikasjonseffektiviteten til flere qPCR-reaksjoner, som kan sikre amplifikasjonseffektiviteten og utføre opptil flere amplifikasjonsreaksjoner.dUTP/UDG-systemet ble lagt til for å effektivt forhindre risikoen for aerosolforurensning.
Komponenter
1. Buffer
2. Enzymblanding
Spesifikasjon
| Varm start | Innebygd varmstart |
| Deteksjonsmetode | Primer-probe deteksjon |
| PCR metode | Ett trinn RT-qPCR |
| Polymerase | Taq DNA-polymerase |
| Type prøve | DNA |
Lagringsforhold
Produktet sendes med tørris og kan lagres ved -25~-15 ℃ i 1 år.Det bør unngå hyppigefryse-tine.Det anbefales å lagre separat.
Bruksanvisning
1.Reaksjon System
| Komponenter | Volum (μL) | Endelig konsentrasjon |
| 2 × MP buffer | 12.5 | 1× |
| Enzymblanding | 1 | - |
| Primer/probeblanding (2,5 μM) | 3 | 0,3 μM |
| Mal RNA | 1-10 | - |
| RNase-fri H2O | til 25 | - |
Merknader:
Sørg for å blande godt før bruk, unngå for store bobler forårsaket av voldsomme vibrasjoner.
en.Primerkonsentrasjon: Primerblanding inkludert multipleks primer, avhengig av situasjonen kan optimal primerkonsentrasjon være mellom 0,l og 1,0μM.
b.Probekonsentrasjon: Probeblanding inkludert multipleks probemerking forskjell fluorescerende gruppe, avhengig av situasjonen kan optimal probekonsentrasjon være mellom 0,05 og 0,5μM.
c.Malfortynning: qPCR er svært sensitiv og det anbefales å fortynne malen.Kontroll-Ct-verdien passer mellom 20 og 35.
d.Systemforberedelse: Vennligst klargjør i det ultrarene arbeidsbordet, og pipetten og reaksjonsrøret uten nukleaserester;det anbefales å bruke pistolhodet med filterelement.Unngå krysskontaminering og aerosolkontaminering.
2. Optimalisert syklingProtokoll
| Syklus steg | Temp. | Tid | Sykluser |
| Omvendt transkripsjon | 50 ℃en | 20 minutter | 1 |
| Innledende denaturering | 95 ℃ | 5 minutter | 1 |
| Amplifikasjonsreaksjon | 95 ℃ | 15 sek |
40-45 |
| 60 ℃ b | 30 sek c |
Merknader:
en.Omvendt transkripsjon: Temperaturen kan velges 42°C eller 50°C.
b.Amplifikasjonsreaksjon: Temperaturen justeres i henhold til Tm-verdien til de utformede primerne.
c.Fluorescenssignalinnsamling: Vennligst still inn den eksperimentelle prosedyren i henhold til kravene i instrumenthåndboken.
Notater
Vennligst bruk nødvendig PPE, som laboratoriefrakk og hansker, for å sikre din helse og sikkerhet.
