RT-LAMPE Colormetrisk Master Mix HCB5204A
Dette produktet inneholder reaksjonsbuffer, RT-Enzymes Mix (Bst DNA-polymerase og varmebestandig revers transkriptase), lyofiliserte Protectants og kromogene fargestoffkomponenter.For å bruke, bruk bare Buffer, reaksjonsenzymet og primeren blandes og legges til malen;å legge til frysetørket beskyttelsesmiddel kan være rett.Den ble koblet til en lyofilisering og lyofilisert, og bare primerne og malene ble tilsatt når de ble brukt.Dette settet gir en rask, tydelig visuell deteksjon av amplifikasjon, hvilken negative reaksjon er indikert i rødt og positiv reaksjon er indikert med en endring til gul.
Komponent
| Komponent | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Sløyfemediert amplifikasjonsbuffer (med fargestoff) | 0,96 ml | 4,80 mL×2 | 9,60 ml × 10 |
| RT-Enzymes Mix | 270 μL | 2,70 ml | 2,70 ml x 10 |
| Lyofilisert beskyttelsesmiddel | 0,96 ml × 2 | 9,60 mL×2 | 9,60 mL×20 |
applikasjoner
For isotermisk forsterkning av DNA eller RNA.
Lagringsforhold
Transportert med tørris, lagret ved -25~ -15℃.Unngå hyppig frysing-tining, produktet er gyldig i 12 måneder.
Protokoll
1.Tin reaksjonsbufferen som skal brukes ved romtemperatur.Vortex kort eller snu rørene flere ganger for å blande grundig, og sentrifuger deretter for å samle væsken til bunnen av røret.
2.Klargjøring av reaksjonssystem.Dette reagenset kan fremstilles i to reaksjonssystemer, flytende reaksjonsblanding og lyofilisert systemblanding.
1) Forbered flytende reaksjonsblanding
| Komponent | Volum |
| Sløyfemediert amplifikasjonsbuffer (med fargestoff) | 10 μL |
| RT-Enzymes Mix | 2,8 μL |
| 10 × Primer Mixa | 5 μL |
| Maler DNA/RNA b | × μL |
| Nukleasefritt vann | Opptil 50 μL |
2) Lyofiliseringssystemblanding
① Forbered lyofilisert blanding
| Komponent | Volum |
| Sløyfemediert amplifikasjonsbuffer (med fargestoff) | 10 μL |
| Lyofilisert beskyttelsesmiddel | 20 μL |
| RT-Enzymes Mix | 2,8 μL |
| Nukleasefritt vann | Opptil 50 μL |
② Lyofilisering: Den tilberedte blandingen ble frysetørket i et 50μL system
③ Forbered reaksjonsblanding
| Komponent | Volum |
| Lyofilisert blanding | 1 stk |
| 10 × Primer Mixa | 5 μL |
| Maler DNA/RNA b | × μL |
| Nukleasefritt vann | Opptil 50 μL |
Merknader:
1) a.10×Primer Mix: 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM Loop F/B;
2) b.DEPC (vannløselig) anbefales for nukleinsyretempl.
1.Inkuber ved 65 °C i 30-45 minutter, som kan forlenges på passende måte i henhold til fargeendring Reaksjonstid.
2.Ifølge det blotte øye var gult positivt og rødt negativt.
Notater
1.Salt kan dukke opp i bunnen av bufferrøret, vortex kort eller snu rørene flere ganger for å blandes grundig ved romtemperatur.
2.Reaksjonstemperaturen kan optimaliseres mellom 62 ℃ og 68 ℃ i henhold til tilstanden til primere.
3.De pakkede reagensene bør ikke utsettes for luft over lengre tid.
4.Den røde og gule misfargingsreaksjonen avhenger av pH-endringen i reaksjonssystemet, vennligst ikke bruk den inneholdende Tris-nukleinsyrelagringsløsningen, anbefalt å bruke ddH2O lagret nukleinsyre;
5.Eksperimentet bør standardiseres, inkludert klargjøring av reaksjonssystemet, lyofilisering og prøvebehandling og prøvetilsetningsprosess;
6.For å unngå kontaminering anbefales det å klargjøre reaksjonssystemet i en ultra-ren benk, i andre Legg maler til avtrekket i rommet for å unngå falsk positiv interferens.
