Prøvefrigjøringsreagens
Prøvefrigjøringsreagens er for molekylære POCT-diagnostiske scenarier.For de to systemene med direkte amplifikasjon LAMP og direkte amplifikasjon PCR er det ikke behov for nukleinsyreekstraksjon.Det rå lysatet av prøven kan amplifiseres direkte, målgenet kan detekteres nøyaktig, prøvedeteksjonstiden kan forkortes ytterligere, noe som perfekt samsvarer med applikasjonskravene til molekylær POCT.Den er egnet for neseprøver, svelgprøver og andre prøvetyper.De behandlede prøvene kan brukes direkte for kvantitativ PCR- eller LAMP-deteksjon i sanntid, og de samme resultatene som konvensjonelle ekstraksjonsmetoder kan oppnås uten kompliserte nukleinsyreekstraksjonsoperasjoner.
Lagringsforhold
Transporter og oppbevar i romtemperatur.
Kvalitetskontroll
Funksjonell deteksjon – kvantitativ qPCR: 800μl prøvefrigjøringsreagenssystemet ble forsterket
med 1000 eksemplarer Novel Pseudovirus, en nesepinneprøve, resulterende lignende amplifikasjonskurver ogΔCt-verdier innenfor ± 0,5 Ct.
Eksperimentell prosedyreres
1. Ta 800 μl prøvefrigjøringsreagens og fordel lyseringsløsningen i 1,5 mL prøvetakingsrør
2. Ta neseprøven eller svelgpinnen med vattpinne; Prøveprosedyre for neseprøvetaking: ta den sterile vattpinnen og legg den inn i neseborene, gå sakte frem til ca. 1,5 cm dyp, roter forsiktig 4 ganger mot neseslimhinnen i mer enn 15 sekunder , gjenta deretter den samme operasjonen på det andre nesehulen med samme vattpinne. Prosedyre for prøvetaking av halspinne: ta den sterile vattpinnen og tørk forsiktig av svelgmandlene og bakre svelgvegg 3 ganger.
3.Plasser vattpinnen umiddelbart i prøvetakingsrøret.Vaskehodet bør roteres og blandes i oppbevaringsløsningen i minst 30 sekunder for å sikre at prøven elueres fullstendig i prøvetakingsrøret.
4. Inkubering ved romtemperatur (20~ 25 ℃) i 1 min, forberedelsen av lyseringsbuffer er fullført.
5. Både 25μl system RT-PCR og RT-LAMP var kompatible med 10μl mengde maltilsetning for deteksjonseksperimenter.
Notater
1. Minimumsmengden av prøve direkte lysat som tilsvarer en enkelt vattpinne kan justeres til 400μl, som kan justeres i henhold til testbehovene.
2. Når prøven er behandlet av prøvefrigjøringsreagenset, anbefales det å gjennomføre neste fase av testen så snart som mulig, intervallventetiden er fortrinnsvis mindre enn 1 time.
3. Prøvelysatets pH er sur, og deteksjonssystemet må ha en viss buffer.Den er egnet for de fleste PCR-, RT-PCR- og LAMP-fluorescensdeteksjon med pH-buffer, men ikke egnet for LAMP-kolorimetrisk deteksjon uten buffer.
