Varmstart Bst 2.0 DNA-polymerase (glyserolfri)
Bst DNA-polymerase V2 er avledet fra Bacillus stearothermophilus DNA-polymerase I, som har 5′→3′ DNA-polymeraseaktivitet og sterk kjedeerstatningsaktivitet, men ingen 5′→3′ eksonukleaseaktivitet.Bst DNA Polymerase V2 er ideelt egnet for strengforskyvning, isotermisk amplifikasjon LAMP (Loop-mediert isotermisk amplifikasjon) og rask sekvensering.Bst DNA polymerase V2 er en varmstartversjon basert på Bst DNA polymerase V2 (HC5005A) oppnådd ved reversibel modifikasjonsteknologi, som kan hemme DNA-polymeraseaktivitet ved romtemperatur, slik at reaksjonssystemet kan drives og formuleres ved romtemperatur for å forhindre ikke -spesifikk forsterkning og forbedre reaksjonseffektiviteten, og denne versjonen kan lyofiliseres.I tillegg frigjøres aktiviteten ved høye temperaturer, så det er ikke behov for et separat aktiveringstrinn.
Komponenter
| Komponent | HC5006A-01 | HC5006A-02 | HC5006A-03 |
Bst DNA polymerase V2 (glyserolfri) (8U/μL) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| 10×HC Bst V2 buffer | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 3×10 ml |
| MgSO4(100 mm) | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 2×10 ml |
applikasjoner
1.LAMP isoterm forsterkning
2.Enkeltforskyvningsreaksjon med DNA-tråd
3.Høy GC-gensekvensering
4.DNA-sekvensering av nanogramnivå.
Lagringsforhold
Transport under 0°C og lagres ved -25°C~-15°C.
Enhetsdefinisjon
En enhet er definert som mengden enzym som inkorporerer 25 nmol dNTP i syreuløselig materiale på 30 minutter ved 65°C.
Kvalitetskontroll
1.Protein Purity Assay (SDS-PAGE):Renheten til Bst DNA-polymerase V2 er ≥99 % bestemt ved SDS-PAGE-analyse ved bruk av Coomassie Blue-deteksjon.
2.EndonukleaseAktivitet:Inkubering av en 50 μL reaksjon som inneholder minimum 8 U av Bst DNA-polymerase V2 med 1 μg λDNA i 16 timer ved 37 ℃ resulterer i ingen detekterbar nedbrytning som bestemt.
3.Eksonukleaseaktivitet:Inkubering av en 50 μL reaksjon som inneholder minimum 8 U Bst DNA polymerase V2 med 1 μg λ -Hind Ⅲ fordøyd DNA i 16 timer ved 37 ℃, resulterer i ingen detekterbar nedbrytning som bestemt.
4.Nickase-aktivitet:Inkubering av en 50 μL reaksjon som inneholder minimum 8 U av Bst DNA polymerase V2 med 1 μg pBR322 DNA i 16 timer ved 37 °C, resulterer i ingen påvisbar nedbrytning som bestemt.
5.RNase-aktivitet:Inkubering av en 50 μL reaksjon som inneholder minimum 8 U Bst DNA-polymerase V2 med 1,6 μg MS2 RNA i 16 timer ved 37 °C, resulterer i ingen detekterbar nedbrytning som bestemt.
6.E coliDNA:120 U av Bst DNA polymerase V2 screenes for tilstedeværelse av E. coli genomisk DNA ved bruk av TaqMan qPCR med primere spesifikke for E. coli 16S rRNA locus.E. coli genomisk DNA-kontaminering er ≤1 kopi.
LAMPEREaksjon
| Komponenter | 25μL |
| 10×HC Bst V2 buffer | 2,5 μL |
| MgSO4 (100 mm) | 1,5 μL |
| dNTP-er (10 mM hver) | 3,5 μL |
| SYTO™ 16 Grønn (25×)a | 1,0 μL |
| Primerblandingb | 6 μL |
| Bst DNA-polymerase V2 (glyserolfri) (8 U/uL) | 1 μL |
| Mal | × μL |
| ddH2O | Opptil 25 μL |
Merknader:
1) a.SYTOTM 16 Grønn (25×): I henhold til eksperimentelle behov kan andre fargestoffer brukes som erstatninger;
2) b.Primerblanding: oppnådd ved å blande 20 µM FIP, 20 µM BIP, 2,5 µM F3, 2,5 µM B3, 5 µM LF, 5 µM LB og andre volumer.
Reaksjon og tilstand
1 × HC Bst V2-buffer, inkubasjonstemperaturen er mellom 60°C og 65°C.
Varmeinaktivering
80°C, 20 minutter
