2×HiF Taq pluss Master Mix
Kat.nr.: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (With Dye) er en klar-til-bruk 2x ferdigblandet løsning som inneholder Plus HIF DNA-polymerase, dNTP-er og optimalisert buffer.To monoklonale antistoffer ved romtemperatur som hemmer polymeraseaktivitet og 3′→5′eksonukleaseaktivitet tilsettes masterblandingen for enkel og svært spesifikk Hot Start PCR.Ekstensjonsfaktoren legges til masterblandingen for å gi enzymet en lang fragmentamplifikasjonskapasitet, lengden på amplifikasjonen kan være opptil 13 kb, enzymet har en 5′→3′ DNA-polymeraseaktivitet og en 3′→5′ eksonukleaseaktivitet, er dens troskap 83 ganger den for Taq DNA-polymerase, som er 9 ganger den for vanlig DNA-polymerase.Det er egnet for amplifisering av komplekse maler, amplifikasjonsproduktet er en butt ende.
2×HIF Taq plus Master Mix(With Dye) har fordelene med rask og enkel, høy sensitivitet, sterk spesifisitet, god stabilitet, etc., reaksjonssystemet trenger bare å legge til primere og maler, og kan forsterkes med en to- trinnprotokoll, som forenkler de eksperimentelle trinnene og sparer tid.Dette produktet inneholder elektroforeseindikatorfargestoffer, og PCR-produkter kan brukes direkte til elektroforese.I tillegg inneholder produktet også et spesifikt beskyttelsesmiddel, slik at masterblandingen kan opprettholde stabil aktivitet etter gjentatt frys-tine.
Lagringsforhold
Produktene bør lagres ved -25~-15 ℃ i 1 år.
Spesifikasjoner
Produkt spesifikasjon | Master Mix |
Konsentrasjon | 2× |
Varm start | Innebygd Hot Start |
Overheng | Sløv |
Reaksjonshastighet | Rask |
Størrelse (sluttprodukt) | Opptil 13kb |
Betingelser for transport | Tørris |
Produkttype | High fidelity PCR-premikser |
Bruksanvisning
1.PCR-reaksjonssystem
Komponenter | Volum (μL) |
DNA-mal | Passende |
Fremover primer (10 μmol/L) | 2.5 |
Omvendt primer (10 μmol/L) | 2.5 |
2×HIF Taq pluss Master Mix | 25 |
ddH2O | til 50 |
2.Anbefalt bruk av forskjellige maler
Type mal | Amplifiser fragmenter fra 1 kb til 10 kb |
Genomisk DNA | 50 ng-200 ng |
Plasmid eller viralt DNA | 10pg-20ng |
cDNA | 1-2,5 µL (Ikke overskrid 10 % av det endelige PCR-reaksjonsvolumet) |
3.Amplifikasjonsprotokoll
1) To-trinns protokoll (kompleksitetsmal)
Syklustrinn | Temp. | Tid | Sykluser |
Innledende denaturering | 98℃ | 3 min | 1 |
Denaturering | 98℃ | 10 sek | 30-35 |
Utvidelse | 68 ℃ | 30 sek/kb | |
Endelig utvidelse | 72℃ | 5 min | 1 |
2) Tre-trinns protokoll (vanlig protokoll)
Syklustrinn | Temp. | Tid | Sykluser |
Innledende denaturering | 98℃ | 3 min | 1 |
Denaturering | 98℃ | 10 sek | 30-35 |
Gløding | 60 ℃ | 20 sek | |
Utvidelse | 72℃ | 30 sek/kb | |
Endelig utvidelse | 72℃ | 5 min | 1 |
3) Annealing Gradient Protocol (kompleksitetsmal)
Syklustrinn | Temperatur | Tid | Sykluser |
Innledende denaturering | 98℃ | 3 min | 1 |
Denaturering | 98℃ | 10 sek | 15 (1 ℃ reduksjon per syklus) |
Gradientgløding | 70-55 ℃ | 20 sek | |
Utvidelse | 72℃ | 30 sek/kb | |
Denaturering | 98℃ | 10 sek |
20 |
Gløding | 55 ℃ | 20 sek | |
Utvidelse | 72℃ | 30 sek/kb | |
Endelig utvidelse | 72℃ | 5 min | 1 |
Funksjoner under forskjellige forsterkningsprotokoller
Protokol | To steg | Tre-trinn | Gradientgløding |
Spes. | fort | medium | langsom |
Spesifisitet | høy | medium | høy |
PCR-utbytte | medium | høy | medium |
Deteksjonshastighet | høy | medium | høy |
Notater
Vennligst bruk nødvendig PPE, slik laboratoriefrakk og hansker, for å sikre din helse og sikkerhet!