DNase I (Rnase-fri) (5u/ul)
Kat.nr.: HC4007A
DNase I (Deoksyribonuklease I) er en endodeoksyribonuklease som kan fordøye enkelt- eller dobbelttrådet DNA.Den gjenkjenner og spalter fosfodiesterbindinger for å produsere monodeoksynukleotider eller enkelt- eller dobbelttrådede oligodeoksynukleotider med fosfatgrupper ved 5'-terminalen og hydroksyl ved 3'-terminalen.Aktiviteten til DNase I avhenger av Ca2+og kan aktiveres av toverdige metallioner som Mn2+og Zn2+.5 mM Ca2+beskytter enzymet mot hydrolyse.I nærvær av Mg2+, kunne enzymet tilfeldig gjenkjenne og spalte et hvilket som helst sted på en hvilken som helst DNA-streng.I nærvær av Mn2+, kan de doble DNA-trådene samtidig gjenkjennes og spaltes på nesten samme sted for å danne flatende DNA-fragmenter eller klebrige ende-DNA-fragmenter med 1-2 nukleotider som stikker ut.
Komponenter
| Navn | 0,1KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNase I, RNase-fri | 20 μL | 200 μL | 1 ml | 10 ml |
| 10×DNase I-buffer | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5 x 10 ml |
Lagringsforhold
-25 ℃ ~ -15 ℃ for lagring;Transport under isposer.
Bruksanvisning
1. Forbered reaksjonsløsningen i det RNase-frie røret i henhold til proporsjonene som er oppført nedenfor:
| Komponent | Volum |
| RNA | X ug |
| 10 × DNase I-buffer | 1μL |
| DNase I, RNase-fri (5U/μL) | 1 U per µg RNA① |
| ddH2O | Opptil 10μL |
Merk: ①Beregn volumet av DNase I som må tilsettes basert på mengden RNA.
2. 37 ℃ i 15 minutter;
3. Tilsett 0,5 M EDTA til den endelige konsentrasjonen på 2,5 mM~5 mM, og varm opp ved 65 ℃ i 10 minutter for å stoppe reaksjonen.Prøven kan brukes direkte til neste reaksjon som revers transkripsjoneksperiment.
Enhetsdefinisjon
En enhet er definert som mengden enzym som vil bryte ned 1 µg pBR322 fullstendigDNA på 10 minutter ved 37℃.
Kvalitetskontroll
RNase:5U DNase I med 1,6 µg MS2 RNA i 4 timer ved 37 ℃ gir ingen nedbrytning dabestemt ved agarosegelelektroforese.
Notater
1. Forbered 0,5MEDTA selv.
2. Bruk 1U DNase I per µg RNA.Imidlertid, hvis RNA er mindre enn 1 µg, vennligst bruk 1U DNase I.
3. Plasser enzymet på is under drift.
