Multiplex qPCR Probe Premix
Kat.nr.: HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (Dye Based) er en forhåndsløsning for 2 × sanntids kvantitativ PCR-amplifikasjon preget av høy sensitivitet og spesifisitet, som er blå i fargen, og har effekten av prøvetilsetning.Dette produktet er en 2× Mix forhåndsblandet reagens som muliggjør opptil fire fluorescerende kvantitative PCR-reaksjoner i en enkelt reaksjonsbrønn.Dette produktet inneholder den genetisk modifiserte antistoffmetoden for å hotstarte Taq-enzymet, noe som i stor grad forbedrer amplifikasjonssensitiviteten og spesifisiteten.Samtidig har dette produktet dypt optimalisert multireaksjonsbufferen, noe som kan forbedre amplifikasjonseffektiviteten til reaksjonen og fremme effektiv amplifisering av maler med lav konsentrasjon.Dette produktet kan brukes til genotyping og multipleks kvantitativ analyse.
Spesifikasjon
| Varm start | Innebygd varmstart |
| Deteksjonsmetode | Primer-probe deteksjon |
| PCR metode | qPCR |
| Polymerase | Taq DNA-polymerase |
| Type prøve | DNA |
Lagringsforhold
Produktet sendes med tørris og kan lagres ved -25~-15 ℃ i 2 år.
Bruksanvisning
1. ReaksjonSystem
| Komponenter | Volum (μL) | Endelig konsentrasjon |
| 2× TaqMan multipleks qPCR Master Mix | 12.5 | 1× |
| Primerblanding (10 μmol/L) a | × | 0,1 - 0,5 μmol/L |
| Probeblanding (10 μmol/L)b | × | 50 - 250 nmol/L |
| Rox referansefargestoff | 0,5 | 1× |
| Template DNA/cDNA | 1-10 | - |
| ddH2O | opptil 25 | - |
Merknader:Bland grundig før bruk for å unngå for store bobler fra kraftig risting.
en.Primerkonsentrasjon: Primer Mix inneholder flere primerpar, vanligvis hver primer med en sluttkonsentrasjon på 0,2 μmol/L og kan også justeres mellom 0,1 og 0,5 μmol/L etter behov.
b.Probekonsentrasjon: Probe Mix inneholder flere prober med forskjellige fluorescenssignaler, og konsentrasjonen til hver probe kan justeres mellom 50 og 250 nmol/L i henhold til spesifikk situasjon.
1.Rox fargestoffreferanse: Den brukes på sanntids PCR-amplifikasjonsinstrumenter som Applied Biosystems for å korrigere feilen i fluorescenssignalet generert mellom brønner;dette produktet inneholder ikke Rox fargestoffreferanse.Cas#10200 anbefales om nødvendig.
2.Malfortynning: qPCR er svært sensitiv, og det anbefales å fortynne malen for bruk.Hvis malen er en cDNA-stamløsning, bør malvolumet ikke overstige 1/10 av det totale volumet.
3.Reaksjonssystem: 25μL, 30μL eller 50 μL anbefales for å sikre effektiviteten og repeterbarheten til målgenamplifikasjon.
4.Systemforberedelse: Forbered deg i den superrene benken, og bruk spissene og reaksjonsrørene uten nukleaserester;det anbefales å bruke spissene med filterpatroner.Unngå krysskontaminering og aerosolkontaminering.
2.Reaksjonsprogram
| Syklustrinn | Temp. | Tid | Sykluser |
| Innledende denaturering | 95 ℃ | 5 minutter | 1 |
| Denaturering | 95 ℃ | 15 sek | 45 |
| Gløding/Forlengelse | 60 ℃ | 30 sek |
Merknader:
1.Utglødning/forlengelse: Temperaturen og tiden kan justeres på passende måte i henhold til den utformede primer-Tm-verdien.
2.Fluorescenssignalinnsamling: Fluorescenssignalinnsamlingstiden som kreves for forskjellige qPCR-deteksjonsinstrumenter er forskjellig, vennligst still inn i henhold til minimumstidsgrensen.Tiden for flere vanlige instrumenter er satt som følger:
20 sek: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 sek: Applied Biosystems 7300
32 sek: Applied Biosystems 7500
Notater
Vennligst bruk nødvendig PPE, slik laboratoriefrakk og hansker, for å sikre din helse og sikkerhet!
