Universal SYBR GREEN qPCR Premix (blå)

Kat.nr.: HCB5041B

Universal Blue qPCR Master Mix (Dye Based) er en forhåndsløsning for 2×sanntids kvantitativ PCR-amplifisering preget av høy sensitivitet og spesifisitet, er blå i fargen og har effekten av prøvetilsetningssporing.Kjernekomponenten Taq DNA-polymerase bruker antistoff-hotstart for effektivt å hemme ikke-spesifikk amplifikasjon på grunn av primer-annealing under prøvepreparering.Samtidig legger formelen til de fremmende faktorene for å forbedre amplifikasjonseffektiviteten til PCR-reaksjonen og utjevne amplifikasjonen av gener med forskjellig GC-innhold (30 ~ 70%), slik at kvantitativ PCR kan oppnå et godt lineært forhold i en bred kvantitativ region.Dette produktet inneholder spesiell ROX Passive Reference Dye, som kan brukes på de fleste qPCR-instrumenter.Det er ikke nødvendig å justere konsentrasjonen av ROX på forskjellige instrumenter.Det er bare nødvendig å legge til primere og maler for å forberede reaksjonssystemet for amplifikasjon.

Komponenter

Universal Blue qPCR Master Mix

Lagringsforhold

Produktet sendes med ispakker og kan lagres ved -25℃~-15℃ i 18 måneder.Det er nødvendig å unngå sterk lysbestråling ved lagring eller klargjøring av reaksjonssystemet.

Spesifikasjon

Bruksanvisning

1.Reaksjonssystem

[Merk]: Bland grundig før bruk for å unngå for store bobler fra kraftig risting.

a) Primerkonsentrasjon: Den endelige primerkonsentrasjonen er 0,2μmol/L, og kan også justeres mellom 0,1 og 1,0μmol/L etter behov.

b) Malkonsentrasjon: Hvis malen er ufortynnet cDNA-stamløsning, bør volumet som brukes ikke overstige 1/10 av det totale volumet av qPCR-reaksjonen.

c) Malfortynning: Det anbefales å fortynne cDNA-stamløsningen 5-10 ganger.Den optimale mengden mal tilsatt er bedre når Ct-verdien oppnådd ved amplifikasjon er 20-30 sykluser.

d) Reaksjonssystem: Det anbefales å bruke 20μL eller 50μL for å sikre effektiviteten og repeterbarheten av målgenamplifikasjon.

e) Systemforberedelse: Vennligst klargjør i den superrene benken og bruk spissene og reaksjonsrørene uten nukleaserester;det anbefales å bruke spissene med filterpatroner.Unngå krysskontaminering og aerosolkontaminering.

2.Reaksjonsprogram

Standard program

Hurtig program

[Merk]: Det raske programmet passer for de aller fleste gener, og standardprogrammer kan prøves for individuelle komplekse sekundære strukturgener.

a) Glødetemperatur og tid: Juster i henhold til lengden på primer og målgen.

b) Fluorescenssignalinnsamling (★): Vennligst still inn den eksperimentelle prosedyren i henhold til kravene i bruksanvisningen til instrumentet.

c) Smeltekurve: Instrumentets standardprogram kan brukes normalt.

3. Resultatanalyse 

Minst tre biologiske replikater var nødvendig for kvantitative eksperimenter.Etter reaksjonen må amplifikasjonskurven og smeltekurven bekreftes.

3.1 Amplifikasjonskurve:

Standard forsterkningskurve er S-formet.Kvantitativ analyse er mest nøyaktig når Ct-verdien faller mellom 20 og 30. Hvis Ct-verdien er mindre enn 10, er det nødvendig å fortynne malen og utføre testen på nytt.Når Ct-verdien er mellom 30-35, er det nødvendig å øke malkonsentrasjonen eller volumet av reaksjonssystemet, for å forbedre amplifikasjonseffektiviteten og sikre nøyaktigheten av resultatanalysen.Når Ct-verdien er større enn 35, kan ikke testresultatene analysere uttrykket av genet kvantitativt, men kan brukes til kvalitativ analyse.

3.2 Smeltekurve:

Den enkle toppen av smeltekurven indikerer at reaksjonsspesifisiteten er god og kvantitativ analyse kan utføres;hvis smeltekurven viser doble eller flere topper, kan ikke kvantitativ analyse utføres.Smeltekurven viser doble topper, og det er nødvendig å bedømme om ikke-måltoppen er primer-dimer eller ikke-spesifikk amplifikasjon ved DNA-agarosegelelektroforese.Hvis det er en primerdimer, anbefales det å redusere primerkonsentrasjonen eller redesigne primere med høy amplifikasjonseffektivitet.Hvis det er ikke-spesifikk amplifikasjon, vennligst øk annealingstemperaturen, eller redesign primerne med spesifisitet.

Notater

Vennligst bruk nødvendig PPE, slik laboratoriefrakk og hansker, for å sikre din helse og sikkerhet!

Dette produktet er KUN for forskningsbruk!