RNAse-hemmer (glyserolfri)
Murin RNase-hemmer er en rekombinant murin RNase-hemmer uttrykt og renset fra E.coli.Den binder seg til RNase A, B eller C i forholdet 1:1 gjennom ikke-kovalent binding, og hemmer dermed aktiviteten til de tre enzymene og beskytter RNA mot nedbrytning.Imidlertid er det ikke effektivt mot RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H eller RNase fra Aspergillus.Murin RNase-hemmer ble testet med RT-PCR, RT-qPCR og IVT mRNA, og var kompatibel med ulike kommersielle revers transkriptaser, DNA-polymeraser og RNA-polymeraser.
Sammenlignet med humane RNase-hemmere inneholder ikke murin RNase-hemmer to cysteiner som er svært følsomme for oksidasjon som forårsaker inaktivering av inhibitoren.Det gjør den stabil ved lave konsentrasjoner av DTT (mindre enn 1 mM).Denne funksjonen gjør den egnet for bruk i reaksjoner der høye konsentrasjoner av DTT er ugunstig for reaksjonen (f.eks. sanntids RT-PCR).
Aapplikasjon
Dette produktet kan brukes mye i ethvert eksperiment der RNase-interferens er mulig for å unngå RNA-nedbrytning, for eksempel:
1. Første-streng cDNA syntese, RT-PCR, RT-qPCR, etc.;
2. Beskytt RNA fra nedbrytning i in vitro transkripsjon/translasjon (f.eks. viral replikasjon in vitro);
3. Hemming av RNase-aktivitet under RNA-isolering og rensing.
Lagringsforhold
Oppbevares ved -25～-15℃;
Fryse-tine-sykluser ≤ 5 ganger;
Gyldig i 1 år.
Enhetsdefinisjon
En enhet er definert som mengden RNase-hemmer som kreves for å hemme aktiviteten til 5 ng RNase A med 50 %.
Molekylær vekt
RNase-hemmer (glyserolfri) er et protein på 50 kDa.
Kvalitetskontroll
Eksonuklease Aktivitet:
Inkubering av 40 U enzym med 1 μg λ-Hind III-fordøyelses-DNA i 16 timer ved 37°C resulterte i ingen detekterbar nedbrytning av DNA, bestemt ved gelelektroforese.
Endonukleaseaktivitet:
Inkubering av 40 U enzym med 1 μg λ DNA i 16 timer ved 37°C resulterte i ingen detekterbar nedbrytning av DNA, bestemt ved gelelektroforese.
Nicking Aktivitet:
Inkubering av 40 U enzym med 1 μg pBR322 i 16 timer ved 37 ℃ resulterte i ingen detekterbar nedbrytning av DNA som bestemt ved gelelektroforese.
RNase Aktivitet:
Inkubering av 40 U enzym med 1,6 μg MS2 RNA i 4 timer ved 37 ℃ resulterte i ingen detekterbar nedbrytning av RNA, bestemt ved gelelektroforese.
E.coli DNA:
40 U enzym påvises av TaqMan qPCR.E.coli-DNA er ≤ 0,1 pg/40U.
Nmerknads
1. Ikke rist eller rør voldsomt for å forhindre enzyminaktivering.
2.RNase-hemmer er aktiv ved temperaturer fra 25℃ til 55℃ og er inaktivert ved ≥65℃.
3. Aktiviteten til RNase H, RNase 1 og RNase T1 hemmes ikke.
4. pH-området for inhibering av RNase-aktivitet er bredt (aktivt ved pH 5-9), og viser maksimal aktivitet ved pH 7-8.
