Rnase A
Ribonuklease A(RNaseA) er et enkelttrådet polypeptid som inneholder 4 disulfidbindinger med en molekylvekt på ca. 13,7 kDa.RNase A er en endoribonuklease som spesifikt bryter ned enkelttrådet RNA ved C- og U-rester.Spesifikt gjenkjenner spaltningen fosfodiesterbindingen dannet av 5'-ribosen til et nukleotid og fosfatgruppen på 3'-ribosen til det tilstøtende pyrimidinnukleotidet, slik at de 2,3'-cykliske fosfatene hydrolyseres til tilsvarende 3 'nukleosidfosfater (f.eks. pG-pG-pC-pA-pG spaltes av RNase A for å generere pG-pG-pCp og A-PG).RNase A er den mest aktive i å spalte enkelttrådet RNA.Anbefalt arbeidskonsentrasjon er 1-100 μ G/mL, kompatibel med ulike reaksjonssystemer.Lav saltkonsentrasjon (0-100 mM NaCl) kan brukes til å kutte enkelttrådet RNA, dobbelttrådet RNA og RNA-kjeder dannet ved RNA-DNA-hybridisering.
Ved høy saltkonsentrasjon (≥0,3 M), spalter RNase A imidlertid spesifikt enkelttrådet RNA.
RNase A brukes oftest for å fjerne RNA under fremstillingen av plasmid-DNA eller genomisk DNA.Hvorvidt DNase er aktiv under forberedelsesprosessen kan lett påvirke reaksjonen.Den tradisjonelle metoden for koking i vannbad kan brukes til å inaktivere DNase-aktivitet.Dette produktet inneholder ikke DNase og protease, og krever ikke varmebehandling før bruk.I tillegg kan dette produktet også brukes i molekylærbiologiske eksperimenter som RNase-beskyttelsesanalyse og RNA-sekvensanalyse.
Lagringsforhold
Produktet skal lagres ved -25 ℃ ~- 15 ℃ i 2 år.
Spesifikasjoner
| Utseende | Pulver |
| Mengde | 100mg / 1g |
| Produkttype | RNase A |
Bruksanvisning
Dette er en av de vanlige metodene for å tilberede RNase A-lagringsløsning.Den kan også tilberedesved andre metoder i henhold til de tradisjonelle metodene i laboratoriet eller referanselitteratur (som f.eksoppløses direkte i 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 eller Tris-NaCl-løsning)
1. Bruk 10 mM natriumacetat (pH 5,2) for å tilberede 10 mg/mL RNase A-lagringsløsning.
2. Oppvarming ved 100 ℃ i 15 min.
3. Avkjøl til romtemperatur, tilsett 1/10 volum av 1 M Tris-HCl (pH 7,4), juster pH til 7,4 (fortilsett for eksempel 500 ml 10 mg/ml RNase-lagringsløsning 1 M Tris-HCl, pH 7,4).
4. Underpakket ved -20 ℃ for frossenlagring, som kan være stabil i opptil 2 år.
[Notater]:
Ved koking av RNaseA-løsning under nøytrale forhold vil det dannes RNase-utfelling;Kok det ved en lavere pH, og hvis det er nedbør, kan det observeres, som kan være forårsaket av tilstedeværelsen av proteinurenheter.Hvis det blir funnet sediment etter koking, kan urenheter fjernes ved høyhastighetssentrifugering (13000rpm), og deretter underpakkes for fryselagring.
Notater
Vennligst bruk nødvendig PPE, slik laboratoriefrakk og hansker, for å sikre din helse og sikkerhet.
