Rnase A
Ribonuklease A (RNaseA) er et enkelttrådet polypeptid som inneholder 4 disulfidbindinger med en molekylvekt på ca. 13,7 kDa.RNase A er en endoribonuklease som spesifikt bryter ned enkelttrådet RNA ved C- og U-rester.Spesifikt gjenkjenner spaltningen fosfodiesterbindingen dannet av 5'-ribosen til et nukleotid og fosfatgruppen på 3'-ribosen til det tilstøtende pyrimidinnukleotidet, slik at de 2,3'-cykliske fosfatene hydrolyseres til den tilsvarende ′nukleosidfosfater (f.eks. pG-pG-pC-pA-pG spaltes av RNase A for å generere pG-pG-pCp og A-PG).RNase A er den mest aktive i å spalte enkelttrådet RNA.Anbefalt arbeidskonsentrasjon er 1-100μG/mL, kompatibel med ulike reaksjonssystemer.Lav saltkonsentrasjon (0-100 mM NaCl) kan brukes til å kutte enkelttrådet RNA, dobbelttrådet RNA og RNA-kjeder dannet ved RNA-DNA-hybridisering.Ved høy saltkonsentrasjon (≥0,3 M), spalter imidlertid RNase A spesifikt enkelttrådet RNA.
RNase A er mest brukt for å fjerne RNA under fremstillingen av plasmid-DNA eller genomisk DNA. Hvorvidt DNase er aktiv under fremstillingsprosessen kan lett påvirke reaksjonen.Den tradisjonelle metoden for koking i vannbad kan brukes til å inaktivere DNase-aktivitet.Dette produktet inneholder ikke DNase og protease, og krever ikke varmebehandling før bruk.I tillegg kan dette produktet også brukes i molekylærbiologiske eksperimenter som RNase-beskyttelsesanalyse og RNA-sekvensanalyse.
Lagringsforhold
Produktet kan lagres ved -25～-15℃, gyldig i 2 år.
Bruksanvisning
Dette er en av de vanlige metodene for å tilberede RNase A-lagringsløsning.Den kan også tilberedes avandre metoder i henhold til tradisjonelle metoder i laboratoriet eller referanselitteratur (som f.eksoppløses direkte i 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 eller Tris-NaCl-løsning)
1. Bruk 10 mM natriumacetat (pH 5,2) for å tilberede 10 mg/mL RNase A lagringsløsning
2. Oppvarming ved 100 ℃ i 15 min
3. Avkjøl til romtemperatur, tilsett 1/10 volum av 1 M Tris-HCl (pH 7,4), juster pH til 7,4 (forfor eksempel, tilsett 500 ml 10 g/ml RNase-lagringsløsning 1M Tris-HCL, PH7.4)
4. Underpakket ved -20 ℃ for fryselagring, som kan være stabil i opptil 2 år.
[Notater]: Ved koking av RNaseA-løsning under nøytrale forhold vil det dannes RNase-utfelling;Kok det ved en lavere pH, og hvis det er nedbør, kan det observeres, som kan være forårsaket av tilstedeværelsen av proteinurenheter.Hvis det blir funnet sediment etter koking, kan urenheter fjernes ved høyhastighetssentrifugering (13000 rpm), og deretter underpakkes for fryselagring.
Produktinformasjon
| Synonymer | Ribonuklease I;Pankreas ribonuklease;Ribonuklease 3'-pyrimidnooligonukleotidohydrolase;rnase A;Endoribonulcease I |
| CAS-nr. | 9001-99-4 |
| Utseende | Hvitt lyofilisert pulver |
| Molekylær vekt | ~ 13,7 kDa (aminosyresekvens) |
| PH verdi | 7.6 (aktivitetsområde 6–10) |
| Passende temperatur | 60 ℃ (Aktivitetsområde 15-70 ℃) |
| Aktiverende agent | Na2+.K+ |
| Inhibitor | RNAse-hemmer |
| Inaktiveringsmetode | Kan ikke inaktiveres ved oppvarming, det anbefales å bruke sentrifugekolonne |
| Opprinnelse | Storfe |
| Løselighet | Løselig i vann (10mg/ml) |
| Tap på tørr | ≤5,0 % |
| Enzymaktivitet | ≥60 Kunitz-enheter/mg |
| Isoelektrisk punkt | 9.6 |
Notater
For din sikkerhet og helse, vennligst bruk laboratoriefrakker og engangshansker for bruk.
