Robustart Taq DNA Polymerase

Robustart Taq DNA Polymerase er en varmstart DNA-polymerase.Dette produktet kan ikke bare bedre hemme den uspesifikke reaksjonen forårsaket av uspesifikk annealing av primere eller primeraggregering i prosessen med forberedelse og amplifikasjon av PCR-systemet.Derfor har den utmerket spesifisitet og er mer effektiv for amplifisering av lavkonsentrasjonsmaler, og den er egnet for multiplekset PCR-amplifikasjonsreaksjon.Dessuten har dette produktet meget god anvendelighet, og stabile amplifikasjonsresultater kan oppnås i forskjellige typer PCR-reaksjoner.

Komponenter

1.5 U/μL Robustart Taq DNA-polymerase

2.10 × PCR Buffer II (Mg²+ fri) (valgfritt)

3.25 mM MgCl₂(valgfri)

* 10 × PCR Buffer II (Mg²+ fri) inneholder ikke dNTP og Mg²+, legg til dNTP og MgCl₂når du forbereder reaksjonssystemet.

Anbefalte applikasjoner

1.Rask forsterkning.

2.Multippel forsterkning.

3.Direkte forsterkning av blod, vattpinner og andre prøver.

4.Påvisning av luftveissykdommer.

Lagringsforhold

-20°C for langtidsoppbevaring, bør blandes godt før bruk, unngå hyppig frys-tine.

*Hvis det kommer nedbør etter nedkjøling, er det normalt;det anbefales å ekvilibrere til romtemperatur før blanding og bruk.

Enhetsdefinisjon

En aktiv enhet (U) er definert som mengden enzym som inkorporerer 10 nmol deoksyribonukleotid i syreuløselig materiale ved 74°C i 30 minutter ved bruk av aktivert laksesæd-DNA som mal/primer.

Kvalitetskontroll

1.SDS-PAGE elektroforetisk renhet større enn 98 %.

2.Amplifikasjonsfølsomhet, batch-til-batch-kontroll, stabilitet.

3.Ingen eksogen nukleaseaktivitet, ingen eksogen endonuklease eller eksonukleasekontaminering

Bruksanvisning

Reaksjonsoppsett

Merknader:

1) a.Bufferen inneholder ikke dNTP og Mg²+, legg til dNTP og MgCl₂når du forbereder reaksjonssystemet.

2) b.Hvis det brukes til qPCR/qRT-PCR, bør fluorescerende prober legges til reaksjonssystemet.Vanligvis vil en endelig primerkonsentrasjon på 0,2 μM gi gode resultater;hvis reaksjonsytelsen er dårlig, kan primerkonsentrasjonen justeres i området 0,2-1 μM.Probekonsentrasjonen er vanligvis optimalisert i området 0,1-0,3 μM.Konsentrasjonsgradienteksperimenter kan utføres for å finne den beste kombinasjonen av primer og probe.

Termisk sykling protokoll

Notater

1.Amplifikasjonshastigheten til rask DNA-polymerase bør ikke være mindre enn 1 kb/10 s.Temperaturstignings- og fallhastigheten, temperaturkontrollmodus og varmeledningseffektiviteten til forskjellige PCR-instrumenter varierer sterkt, så det anbefales å optimalisere de optimale reaksjonsforholdene for det spesifikke hurtige PCR-instrumentet.

2.Systemet er svært tilpasningsdyktig, med høyere spesifisitet og sensitivitet.

3.Egnet for bruk som høysensitive PCR-deteksjonsreagenser, og kan brukes i multiplekse PCR-amplifikasjonsreaksjoner.

4.5′→3′ polymeraseaktivitet, 5′→3′ eksonukleaseaktivitet;ingen 3′→5′ eksonukleaseaktivitet;ingen korrekturfunksjon.

5.Egnet for kvalitativ og kvantitativ testing av PCR og RT-PCR.

6.3'-enden av PCR-produktet er A, som kan klones direkte inn i en T-vektor.

7.Tre-trinnsmetoden anbefales for primere med lave annealingstemperaturer eller for amplifikasjon av fragmenter lengre enn 200 bp.