Viralt DNA/RNA-ekstraksjonssett
Dette settet er egnet for rask ekstraksjon av høyrent viralt DNA/RNA fra prøver som nasofaryngeale vattpinner, miljøpinner, cellekultursupernatanter og vevshomogenate supernatanter.Settet er basert på silikamembranrenseteknologi som eliminerer behovet for å bruke fenol/kloroform organiske løsemidler eller tidkrevende alkoholutfelling for å trekke ut viralt DNA/RNA av høy kvalitet.De oppnådde nukleinsyrene er fri for urenheter og klare til bruk i nedstrøms eksperimenter som revers transkripsjon, PCR, RT-PCR, sanntids PCR, neste generasjons sekvensering (NGS) og Northern blot.
Lagringsforhold
Oppbevares ved 15 ~ 25 ℃, og transporter ved romtemperatur
Komponenter
| Komponenter | 100RXNS |
| Buffer VL | 50 ml |
| Buffer RW | 120 ml |
| RNase-fri ddH2 O | 6 ml |
| FastPure RNA-kolonner | 100 |
| Oppsamlingsrør (2 ml) | 100 |
| RNase-frie oppsamlingsrør (1,5 ml) | 100 |
Buffer VL:Gi et miljø for lysis og binding.
Buffer RW:Fjern gjenværende proteiner og andre urenheter.
RNase-fri ddH2O:Eluer DNA/RNA fra membranen i spinnkolonnen.
FastPure RNA-kolonner:Adsorber spesielt DNA/RNA.
Oppsamlingsrør 2 ml:Samle filtrat.
RNase-frie oppsamlingsrør 1,5 ml:Samle DNA/RNA.
applikasjoner
Nasofaryngeale vattpinner, miljøpinner, cellekultursupernatanter og vevshomogeniserte supernatanter.
Selvforberedt Materials
RNase-frie pipettespisser, 1,5 ml RNase-frie sentrifugerør, sentrifuge, virvelmikser og pipetter.
Eksperimentprosess
Utfør alle de følgende trinnene i et biosikkerhetsskap.
1. Tilsett 200 μl av prøven til et RNase-fritt sentrifugerør (fyll opp med PBS eller 0,9 % NaCl i tilfelle utilstrekkelig prøve), tilsett 500 μl Buffer VL, bland godt ved å vortexe i 15 – 30 sek., og sentrifuger kort for å samle blandingen i bunnen av røret.
2. Plasser FastPure RNA-kolonner i et oppsamlingsrør på 2 ml.Overfør blandingen fra trinn 1 til FastPure RNA-kolonner, sentrifuger ved 12 000 rpm (13 400 × g) i 1 min, og kast filtratet.
3. Tilsett 600 μl buffer RW til FastPure RNA-kolonner, sentrifuger ved 12 000 rpm (13 400 × g) i 30 sekunder, og kast filtratet.
4. Gjenta trinn 3.
5. Sentrifuger den tomme kolonnen ved 12 000 rpm (13 400 × g) i 2 min.
6. Overfør forsiktig FastPure RNA-kolonner til nye RNase-frie oppsamlingsrør 1,5 ml (følger med i settet), og tilsett 30 – 50 μl RNase-fri ddH2O til midten av membranen uten å berøre kolonnen.La stå ved romtemperatur i 1 min og sentrifuger ved 12 000 rpm (13 400 × g) i 1 min.
7. Kast FastPure RNA-kolonner.DNA/RNA kan brukes direkte for påfølgende analyser, eller lagres ved -30~ -15°C i en kort periode eller -85 ~-65°C i en lengre periode.
Notater
Kun til forskningsbruk.Ikke for bruk i diagnostiske prosedyrer.
1. Ekvilibrer prøvene til romtemperatur på forhånd.
2. Virus er svært smittsomme.Sørg for at alle nødvendige sikkerhetstiltak er tatt før eksperimentet.
3. Unngå gjentatt frysing og tining av prøven, da dette kan føre til nedbrytning eller redusert utbytte av det ekstraherte virale DNA/RNA.
4. Selvforberedt utstyr inkluderer RNase-frie pipettespisser, 1,5 ml RNase-frie sentrifugerør, sentrifuge, vortex-mikser og pipetter.
5. Når du bruker settet, bruk en laboratoriefrakk, engangs latekshansker og en engangsmaske og bruk RNase-frie forbruksvarer for å minimere risikoen for RNase-kontaminering.
6. Utfør alle trinn ved romtemperatur med mindre annet er spesifisert.
Mekanisme og arbeidsflyt
