Vill Taq DNA-polymerase
Taq DNA Polymerase er en termostabil DNA-polymerase fra Thermus aquaticus YT-1, som har en 5′→3′ polymeraseaktivitet og en 5′ klaff endonukleaseaktivitet.
Komponenter
| Komponent | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10× Taq-buffer | 2×1 ml | 2×10 ml | 2×50 ml | 5×200 ml |
| Taq DNA-polymerase (5 U/μL) | 0,1 ml | 1 ml | 5 ml | 5×10 ml |
Lagringsforhold
Transport under 0°C og lagres ved -25°C~-15°C.
Enhetsdefinisjon
En enhet er definert som mengden enzym som inkorporerer 15 nmol dNTP i syreuløselig materiale på 30 minutter ved 75°C.
Kvalitetskontroll
1.Protein Purity Assay (SDS-PAGE):Renheten til Taq DNA-polymerase var ≥95 % bestemt ved SDS-PAGE-analyse.
2.Endonuclease aktivitet:Minimum 5 U Taq DNA-polymerase med 1 μg λDNA i 16 timer ved 37 ℃ resulterer i ingen påvisbar nedbrytning som bestemt.
3.Eksonukleaseaktivitet:Minimum 5 U Taq DNA-polymerase med 1 μg λ -Hind Ⅲ fordøyd DNA i 16 timer ved 37 ℃ resulterer i ingen detekterbar nedbrytning som bestemt.
4.Nickase-aktivitet:Minimum 5 U Taq DNA-polymerase med 1 μg pBR322 DNA i 16 timer ved 37 °C resulterer i ingen påvisbar nedbrytning som bestemt.
5.RNase-aktivitet:Minimum 5 U Taq DNA-polymerase med 1,6 μg MS2 RNA i 16 timer ved 37 °C resulterer i ingen detekterbar nedbrytning som bestemt.
6.E coliDNA:5 U Taq DNA-polymerase screenes for tilstedeværelse av E. coli genomisk DNA ved bruk av TaqMan qPCR med primere spesifikke for E. coli 16S rRNA-lokuset.E. coli genomisk DNA-kontaminering er ≤1 kopi.
7.PCR-amplifikasjon (5,0 kb Lambda DNA)- En 50 µL reaksjon som inneholder 5 ng Lambda-DNA med 5 enheter Taq DNA-polymerase i 25 sykluser med PCR-amplifisering resulterer i det forventede 5,0 kb-produktet.
Reaksjonsoppsett
| Komponenter | Volum |
| Mal DNAa | valgfri |
| 10 μM Fremover Primer | 1 μL |
| 10 μM Reverse Primer | 1 μL |
| dNTP-miks (10 mM hver) | 1 μL |
| 10×Taq-buffer | 5 μL |
| Taq DNA-polymeraseb | 0,25 μL |
| Nukleasefritt vann | Opptil 50 μL |
Merknader:
1) Den optimale reaksjonskonsentrasjonen til forskjellige maler er forskjellig.Tabellen nedenfor viser anbefalt malbruk for 50 µL reaksjonssystem.
| DNA | Beløp |
| Genomisk | 1 ng-1 μg |
| Plasmid eller viralt | 1 pg-1 ng |
2) Den optimale konsentrasjonen av Taq DNA-polymerase kan variere fra 0,25 µL~1 µL i spesialiserte applikasjoner.
ReaksjonProgram
| Steg | Temperatur(°C) | Tid | Sykluser |
| Innledende denatureringa | 95 ℃ | 5 minutter | - |
| Denaturering | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 sykluser |
| Glødingb | 60 ℃ | 15 s | |
| Utvidelse | 72 ℃ | 1 kb/min | |
| Endelig utvidelse | 72 ℃ | 5 minutter | - |
Merknader:
1) Den innledende denatureringsbetingelsen er egnet for de fleste amplifikasjonsreaksjoner og kan modifiseres i henhold til kompleksiteten til malstrukturen.Hvis malstrukturen er kompleks, kan pre-denatureringstiden utvides til 5 – 10 minutter for å forbedre den første denatureringseffekten.
2) Glødetemperaturen må justeres i henhold til Tm-verdien til primeren, som vanligvis er satt til 3~5 ℃ lavere enn Tm-verdien til primeren;For komplekse maler er det nødvendig å justere glødetemperaturen og forlenge forlengelsestiden for å oppnå effektiv forsterkning.
